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一、生物显微镜校准内容
JJF1402-2013《生物显微镜校准规范》，引用的是GB/T2985-2008《生物显微镜》，除了增加示值误差一项，其他项目及技术要求均引用自该标准。
在镜检时，操作者需要的是清晰而明亮的图像，这与显微镜的各项光学技术参数相关，并且要求在使用时，必须根据镜检的目的和实际情况来协调各参数的关系。只有这样，才能充分发挥显微镜应有的性能，得到满意的镜检效果。
显微镜的光学技术参数包括:数值孔径、分辨力、放大倍数、焦深、清晰范围、工作距离等。这些参数并不都是越高越好，它们之间是相互联系又相互制约的。在使用时，应根据镜检的目的和实际情况来协调参数间的关系，但应以保证分辨力为准。放大倍数、左右系统倍数差、视场中心差虽然也会影响观察，但是要求不高，关键是能看清图像。只做观察用的显微镜并没有尺寸测量功能，示值误差的校准不适用于这类显微镜。
在GB/T2985-2008中,是通过成像清晰范围进行性能检查的,不同的物镜倍数不但要求达到相应分辨力水平,还要求保证在一定视场范围内都能达到。JJF1402-2013没有包含分辨力这一测量项目是不科学的。
二、校准用标准器
JJF1402-2013中，校准显微镜放大倍数误差和显微镜左右两系统放大倍数差所提到的"倍率计"，容易产生误解。倍率计是用来测量望远镜放大率的，有相应的标准GJB/J3360-1998《倍率计检定规程》，其结构本身是一种低倍显微镜，不能用来测量显微镜的放大率。测量显微镜总放大率只能使用测量望远镜，也叫显微镜总放大率测定仪。
三、校准方法
1.显微镜物镜放大倍数误差
根据JJF1402-2013之6.2.1.2，对于目镜不可拆卸的显微镜，其物镜放大倍数通过测量计算总放大倍数后，除以目镜放大倍数实测值得到。目镜放大倍数如何测得未作任何描述。根据GB/T2985-2008，目镜需要拆卸下来，使用焦距仪按公式计算得到。
在不拆卸目镜的情况下，可以将已知放大倍数的标准物镜安装在被测显微镜镜架上，与待测目镜组成完整的光路系统，通过JJF1402-2013之6.2.1.2的方法计算总放大倍数，除以标准物镜的放大倍数得出待测目镜的放大倍数。得到目镜放大倍数后，再使用待测物镜与目镜重新组成光路系统，测出总放大倍数，除以目镜放大倍数实测值，从而得出待测物镜放大倍数。
2.双目显微镜左右两系统放大倍数差
该校准项目测量方法描述有两处错误:
(1)方法中计算的是差值的绝对值，而计量特性要求里允差却是相对值的2%。如果以绝对误差来计算差值，方法中却未描述是使用多少倍物镜测量。而采用相对误差时，虽然物镜倍数不影响结果，但从严谨的角度，还是需要完整描述所使用物镜的倍数。
(2)方法中提到"按6.2.1.2的步骤，对左右两个观察系统的放大倍数分别进行测量，依据公式(1)计算得到两观察系统放大倍数"(此处引用公式为JJF1402-2013中的公式)。步骤6.2.1.2，即使用总放大率测定仪的方式计算放大倍数，间距像的长度是测定仪上测到的，实际的倍率计算见公式(1)。
式中:MT--显微镜总放大率；Y0--测定仪上物镜测微尺、分划刻线重合的长度，mmYe-测微尺上所用间距，mm；K--测定仪的常数。
由式(1)可知，实际放大倍数的计算并不是由JJF1402-2013中的式(1)计算得到的。
四、物镜放大倍数误差测量结果的不确定度评定
附录B显微镜物镜放大倍数误差测量结果不确定度评定也有两处错误。
1.B.2是无法由B.1转换得到的，不能这样处理。
根据物镜放大倍数误差计算公式
式中:Δβ--物镜放大倍数误差；Li--标准玻璃线纹尺所用间距的像在目镜分划尺上的实际长度，mm；L0--标准玻璃线纹尺所用间距的像在目镜分划尺上的标称长度，mm。
分别对式(2)中的Li和L0求偏导，求得灵敏系数
由于在正常情况下Li与L0数值很接近，可将Li≈L0，式(3)可简化为
故不确定度的大小跟测量所用的间距关系很大，同等物镜倍数情况下，选用间距越大，不确定度越小。
2.对于B.5.2.1标准玻璃线纹尺不准引入的标准不确定度，计算时只考虑到线纹尺本身的误差，但实际测量时，线纹尺像是经过物镜放大后再与目镜分划尺比较读数的，其影响量应该乘以系数K′(K′为物镜放大倍数)。
此外，附录B测量不确定度评定的测量模型适用于目镜可拆卸的显微镜。对于无法拆卸目镜，需使用放大率测定仪的显微镜，其放大倍数误差测量结果不确定度还需另外评定，这是容易忽略的。
链接：
本文刊发于《中国计量》杂志2018年第9期
作者：广州计量检测技术研究院 杨昭信
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